Transformação Genética De Candida Spp Via Agrobacterium Tumefaciens – Marcelo Tempesta De Oliveira

Transformação Genética De Candida Spp Via Agrobacterium Tumefaciens – Marcelo Tempesta De Oliveira
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Resumo:

Este trabalho descreve o estabelecimento de um sistema de transformação eficiente para as espécies de leveduras oportunistas Candida albicans; C. tropicalis e C. glabrata; importantes patógenos humanos; pelo emprego da metodologia de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens. As células fúngicas foram transformadas em diferentes condições de co-cultivo utilizando o vetor binário pBTS-4; que contém o gene de resistência ao antibiótico Higromicina B (hph) como marcador de seleção. Nossos resultados indicam uma freqüência de transformação para C. albicans; C. tropicalis e C. glabrata de até 1471; 1612 e 83 transformantes obtidos por co-cultivo; respectivamente. Após quatro repiques em meio não seletivo; todos os transformantes analisados cresceram quando expostos novamente ao meio de seleção; sendo desta forma 100% estáveis mitóticamente. A PCR e o dot-blot confirmaram molecularmente a transformação das espécies de Candida; gerando o produto de amplificação esperado de 600pb; e hibridado positivamente com os transformantes quando o mesmo foi utilizado como sonda. A habilidade da linhagem AGL-1 em aderir às células fúngicas nas condições de co-cultivo foi observada através do emprego de microscopia eletrônica de varredura e transmissão. A reprodutibilidade do sistema de transformação descrito neste trabalho pode fornecer um método para a manipulação genética destes patógenos que irá facilitar a análise molecular detalhada destas espécies fúngicas.

Detalhes:

  • Categoria: Teses e dissertações
  • Instituição: UEL/MICROBIOLOGIA
  • Área de Conhecimento: MICROBIOLOGIA
  • Nível: Mestrado
  • Ano da Tese: 2007
  • Tamanho: 7.28 MB
  • Fonte: Portal Domínio Público

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